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本文简介：美味牛肝菌(Boletus edulis Ball.ex Fr)属于担子菌亚门(Basidiom yco tina)、层菌纲(Hym enomy cetes)、伞菌目(Aga ricases)、牛肝菌科(Boletaceae)中的一种，是一种世界范围内分布的食药兼用经济价值较高的真菌。我国各省均有分布，西南地区产量较高。 美味牛肝菌的肉质肥厚而细嫩,香味浓郁、味道鲜美、营养丰富、风味独特。除具有一定的营养价值,而且具有较高的药用价值，动物实验和临床研究结果表明美味牛肝菌含有多种生物碱可治腰腿疼痛、手足麻

 一种美味牛肝菌的人工栽培方法与流程

本发明属于食用真菌栽培技术领域，具体涉及一种美味牛肝菌的人工栽培方法。

一种美味牛肝菌的人工栽培方法与流程

一、背景技术：

美味牛肝菌(Boletus edulis Ball.ex Fr)属于担子菌亚门(Basidiom yco tina)、层菌纲(Hym enomy cetes)、伞菌目(Aga ricases)、牛肝菌科(Boletaceae)中的一种，是一种世界范围内分布的食药兼用经济价值较高的真菌。我国各省均有分布，西南地区产量较高。

美味牛肝菌的肉质肥厚而细嫩,香味浓郁、味道鲜美、营养丰富、风味独特。除具有一定的营养价值,而且具有较高的药用价值，动物实验和临床研究结果表明美味牛肝菌含有多种生物碱可治腰腿疼痛、手足麻木、盘骨不舒、四肢抽搐以及妇女白带异常等症；

其中的多糖和碱性蛋白可抗肿瘤、病毒,调节人体的免疫功能。作为一种珍贵的野生菌类，美味牛肝菌是我国重要的出口菇类，但是由于它是一种与高等植物共生的菌根真菌，难以在人工培养基上生长，目前商业贸易的美味牛肝菌全部来自于森林中采集的野生资源，无法满足日益增长的需求。

二、技术实现要素：

为解决现有技术中存在的上述问题，本发明的目的在于提供一种美味牛肝菌的人工栽培方法，以期通过体外构建淡竹叶与美味牛肝菌的菌根结构实现美味牛肝菌的人工栽培，同时提高美味牛肝菌各营养成分的含量。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

一种美味牛肝菌的人工栽培方法，包括以下步骤：

1、母种分离培养：采集新鲜、壮实、中等成熟的野生子实体，洗净，表面消毒，于无菌条件下切取组织块于母种培养基中培养；

2、菌种扩繁：将步骤a培养所得母种接入含扩繁培养基的容器内振荡培养，振荡频率为10-30rpm/min；

3、淡竹叶无菌苗培育：挑选成熟淡竹叶竹米，去壳消毒冲洗后置于诱导培养基上培养，待诱导出愈伤组织后经继代及转分化培养得淡竹叶再生植株即淡竹叶无菌苗；

4、菌根苗培育及栽培出菇：将扩繁获得的菌球打碎成菌浆，稀释10-50倍，注射入淡竹叶无菌苗后重新栽培直至培养成菌根苗，然后将菌根苗植入覆土菇床中，培养出菇。

在其中一个实施例，所述方法步骤a的组织块为菌柄、菌盖或菌盖与菌柄交汇处。

在其中一个实施例，所述方法步骤a的母种培养基为马铃薯160-180g、葡萄糖15-17g、酵母浸出汁1.6-1.8g、维生素B126-32ug、水900-1000ml。

在其中一个实施例，所述方法步骤b的扩繁培养基为暗棕壤4-4.5kg、麦子4-4.5kg、桦树木屑1.5-2.5kg、草炭0.6-1kg、硫酸钾0.1-0.2kg、过磷酸钙0.1-0.2kg、凤尾草提取液3-7ml。

在其中一个实施例，所述凤尾草提取液的提取方法为将凤尾草粉碎。过40-50目筛，称取粉末40-50g，加入2-4倍体积的70-90％乙醇60-70℃下回流提取3-5次，1.5-2h/次，合并滤液，离心，取上清液，挥干溶剂后为醇提物，将醇提物用无水乙醇溶解，蒸馏水稀释后调节pH至中性，灭菌后4℃保存备用。

在其中一个实施例，所述方法步骤b的覆土菇床中使用的土壤为海泡石矿物粉、灰沙土、暗棕壤以1:2-3:2.5-4的比例混合而成。

本发明首先利用生长力较强的美味牛肝菌的组织菌柄、菌盖或菌盖与菌柄交汇处培养母种，扩繁成菌球后通过注射的方式注入淡竹叶无菌苗根中，使其快速浸染淡竹叶无菌苗根，缩短菌根苗的培育周期；另外在扩繁培养基中添加凤尾草提取液一方面可以增强扩繁种的抗逆能力，另一方面可以补足美味牛肝菌需要在植物根中吸收的蛋白质、激素、淀粉、生物碱等营养。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：通过体外构建淡竹叶与美味牛肝菌的菌根结构实现美味牛肝菌的人工栽培，能提高美味牛肝菌扩繁种的抗逆能力，同时提高美味牛肝菌自身各营养成分的含量；保护自然生态环境和野生资源，同时栽培技术操作简单、成本低，易于推广，能实现美味牛肝菌的产业化栽培。

三、具体实施方式

为使本技术领域的技术人员能更好地理解本发明的技术方案，下面结合实施例对本发明技术方案进行详细说明。

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1

1、母种分离培养：采集新鲜、壮实、中等成熟的美味牛肝菌野生子实体，洗净，表面消毒，于无菌条件下切取菌柄组织块于母种培养基中培养，所述母种培养基为马铃薯160g、葡萄糖15g、酵母浸出汁1.6g、维生素B126ug、水900ml；

2、菌种扩繁：将步骤a培养所得母种接入含扩繁培养基的容器内振荡培养，振荡频率为10rpm/min，扩繁培养基为暗棕壤4kg、麦子4kg、桦树木屑1.5kg、草炭0.6kg、硫酸钾0.1kg、过磷酸钙0.1kg、凤尾草提取液3ml；

3、淡竹叶无菌苗培育：挑选成熟淡竹叶竹米，去壳消毒冲洗后置于诱导培养基上培养，待诱导出愈伤组织后经继代及转分化培养得淡竹叶再生植株即淡竹叶无菌苗；

4、菌根苗培育及栽培出菇：将扩繁获得的菌球打碎成菌浆，稀释10倍，注射入淡竹叶无菌苗后重新栽培直至培养成菌根苗，然后将菌根苗植入覆土菇床中，培养出菇，其中覆土菇床中使用的土壤为海泡石矿物粉、灰沙土、暗棕壤以1:2:2.5的比例混合而成。

实施例2

1、母种分离培养：采集新鲜、壮实、中等成熟的野生子实体，洗净，表面消毒，于无菌条件下切取菌盖组织块于母种培养基中培养，所述母种培养基为马铃薯170g、葡萄糖16g、酵母浸出汁1.7g、维生素B129ug、水950ml；

2、菌种扩繁：将步骤a培养所得母种接入含扩繁培养基的容器内振荡培养，振荡频率为20rpm/min，扩繁培养基为暗棕壤4.25kg、麦子4.25kg、桦树木屑2kg、草炭0.8kg、硫酸钾0.15kg、过磷酸钙0.15kg、凤尾草提取液5ml；

3、淡竹叶无菌苗培育：挑选成熟淡竹叶竹米，去壳消毒冲洗后置于诱导培养基上培养，待诱导出愈伤组织后经继代及转分化培养得淡竹叶再生植株即淡竹叶无菌苗；

4、菌根苗培育及栽培出菇：将扩繁获得的菌球打碎成菌浆，稀释30倍，注射入淡竹叶无菌苗后重新栽培直至培养成菌根苗，然后将菌根苗植入覆土菇床中，培养出菇，其中覆土菇床中使用的土壤为海泡石矿物粉、灰沙土、暗棕壤以1:2.5:3.25的比例混合而成。

实施例3

1、母种分离培养：采集新鲜、壮实、中等成熟的野生子实体，洗净，表面消毒，于无菌条件下切取菌柄、菌盖或菌盖与菌柄交汇处组织块于母种培养基中培养，所述母种培养基为马铃薯180g、葡萄糖17g、酵母浸出汁1.8g、维生素B132ug、水1000ml；

2、菌种扩繁：将步骤a培养所得母种接入含扩繁培养基的容器内振荡培养，振荡频率为30rpm/min，扩繁培养基为暗棕壤4.5kg、麦子4.5kg、桦树木屑2.5kg、草炭1kg、硫酸钾0.2kg、过磷酸钙0.2kg、凤尾草提取液7ml；

3、淡竹叶无菌苗培育：挑选成熟淡竹叶竹米，去壳消毒冲洗后置于诱导培养基上培养，待诱导出愈伤组织后经继代及转分化培养得淡竹叶再生植株即淡竹叶无菌苗；

4、菌根苗培育及栽培出菇：将扩繁获得的菌球打碎成菌浆，稀释50倍，注射入淡竹叶无菌苗后重新栽培直至培养成菌根苗，然后将菌根苗植入覆土菇床中，培养出菇，其中覆土菇床中使用的土壤为海泡石矿物粉、灰沙土、暗棕壤以1:3:4的比例混合而成。

对比例1

除步骤b的扩繁培养基中不添加凤尾草提取液外，

其它栽培条件同实施例2。

实施例1-3所述凤尾草提取液可以通过以下方法制备：将凤尾草粉碎，过40-50目筛，称取粉末40-50g，加入2-4倍体积的70-90％乙醇60-70℃下回流提取3-5次，1.5-2h/次，合并滤液，离心，取上清液，挥干溶剂后为醇提物，将醇提物用无水乙醇溶解，蒸馏水稀释后调节pH至中性，灭菌后4℃保存备用。

采用常规耐盐、耐高温方法检测实施例1-3及对比例1美味牛肝菌扩繁种在50、100、150、200mmol/LNaCl下的活力；及在30、35、40℃温度下的活力。结果见表1、表2。

表1实施例1-3及对比例1美味牛肝菌扩繁种耐盐测试结果

从表1可知与扩繁培养基中不添加凤尾草提取液的对比例1相比，实施例1-3美味牛肝菌扩繁种的活力显著提高，可见凤尾草提取液可以提高美味牛肝菌扩繁种的耐盐能力。

表2实施例1-3及对比例1美味牛肝菌扩繁种耐高温测试结果

从表2可知与扩繁培养基中不添加凤尾草提取液的对比例1相比，实施例1-3美味牛肝菌扩繁种的活力显著提高，可见凤尾草提取液可以提高美味牛肝菌扩繁种的耐高温能力。

检测实施例1-3出菇所得美味牛肝菌的营养成分，并以野外采集的美味牛肝菌营养成分为参照，结果见表3。

表3实施例1-3出菇所得及野外采集的美味牛肝菌营养成分表

从表3可知，本发明实施例1-3出菇所得美味牛肝菌的营养成分蛋白质、碳水化合物、热量、灰分、Ca、P、Fe、核黄素均高于野外采集的美味牛肝菌相应营养成分的含量。

显然，上述实施例仅是本发明的部分实施例，而不是全部实施例。基于本发明的启示，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式，都属于本方面所保护的范围。

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